赵怀印 , 罗珺峰 , 史洁玮 , 张宁 , 姜晶^*

沈阳农业大学园艺学院, 沈阳, 110866
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2020 年, 第 18 卷, 第 4 篇   
收稿日期: 2019年01月24日    接受日期: 2019年02月27日    发表日期: 2020年04月30日

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植物小分子热激蛋白(small heat shock proteins, sHSPs)是一种多样、古老的蛋白家族，分子量大小普遍在 12~42 kD 之间，包含典型的 C 端、N 端和 琢 晶状体蛋白域。sHSPs 作为一种重要的分子伴侣在植物生长发育和响应逆境胁迫中起着重要的作用。本研究通过构建成熟期番茄果实 cDNA 文库，筛选与 SlHSP17.7互作的蛋白，进而探索 SlHSP17.7 在果实发育进程中的分子机制。以 Micro-Tom 番茄绿熟期、转色期和完熟期果实 cDNA 为模板，构建番茄果实 cDNA 文库。构建 pGBKT7-SlHSP17.7 诱饵载体筛选与其互作的蛋白，利用酵母双杂交实验验证互作关系。经检测番茄果实 cDNA 文库库容是 2.2伊106 CFU，工作液细胞密度是3.6伊107 cell/mL，均一化程度>106，结果符合质控要求。将 pGBKT7-SlHSP17.7 诱饵载体转化 Y2HGold 酵母菌株检测发现，其无毒性和自激活现象，经筛选 cDNA 文库、测序及序列比对分析得到钙阳离子交换体 SlCCX1-like 蛋白，利用酵母双杂交实验验证发现二者存在互作关系。经 PCR 鉴定后，所建文库质量良好，文库的库容和文库滴度均符合建库要求，用 pGBKT7-SlHSP17.7 诱饵载体筛选得到互作蛋白 SlCCX1-like，为进一步研究在果实发育进程 SlHSP17.7 的生物学功能提供了保障。

番茄果实；cDNA 文库；SlHSP17.7；酵母双杂交；SlCCX1-like